Тестът ELISA открива множество заболявания, поради което се използва широко в медицината и др. Въпреки това, ELISA тестът е най-известен със своята диагноза на лаймска болест. Какво представлява тестът ELISA? Как да тълкуваме резултатите? Каква е цената на теста?

Съдържание:

  1. ELISA тест - какво открива? Използване на ELISA
  2. ELISA тест - какво е тестът?
  3. ELISA тест и лаймска болест - кога да се извърши?
  4. ELISA тест - цена. Колко струва ELISA тест?
  5. ELISA тест - резултати. Могат ли да са фалшиво положителни?
  6. ELISA тест - резултати. Могат ли да бъдат фалшиво отрицателни?

ELISA тест , т.е. ензимно-свързаният имуносорбентен анализ, е често използван лабораторен метод, който служи, наред с други, за количествено откриване на антитела в кръвта

Поради товаELISA тестустановеноприложениев диагностиката на бактериални заболявания, катоЛаймска болест с лайм.

Предимството на метода ELISA е неговата простота, бързо изпълнение и висока чувствителност. Методът ELISA се извършва с помощта на специални пластмасови плаки с ямки, пълни с например Borrelia протеини (антигени) и специфични моноклонални антитела, които са предназначени да откриват антитела в пробата на пациента.

ELISA тест - какво открива? Използване на ELISA

Високата чувствителност и простота на метода ELISA го направи приложим при диагностицирането на много заболявания, но той е най-известен като диагностичен метод на лаймска болест.

При диагностиката на лаймската борелиоза се използва т.нар. индиректен ELISA, който позволява да се открият специфични IgM или IgG в тествания материал. По същия начин антителата могат да бъдат открити за диагностични цели:

  • вирусни инфекции: херпес вируси (херпес, херпес зостер, Epstein-Barr, цитомегаловирус), ХИВ, хепатит вируси (HBV и HCV)
  • протозойни инфекции: токсоплазмоза, лямблиаза
  • автоимунни заболявания: цьолиакия (анти-tTG или анти-DPG антитела), болест на Хашимото (анти-TG и анти-TPO антитела), възпалителни заболявания на червата (анти-ASCA и анти-ANCA антитела)
  • паразитни заболявания и алергии,в които се откриват специфични IgE антитела. Тяхното повишено ниво може да показва наличието на алергии, например към цветен прашец и храна, или паразитни инвазии (въоръжена тения, човешки кръгъл червей)

Съществуват и модификации на метода ELISA (т.нар. сандвич ELISA), които позволяват откриването на тествана проба от протеини, различни от антитела. Тогава целта на изследването е да се открие в биологичния материал:

  • фрагменти от вируси или бактерии, най-често това са антигени, специфични за даден патоген
  • серумни хормони, напр. естроген, пролактин, TSH, fT4, кортизол
  • ензими, напр. калпротектин, панкреатична еластаза, алкална фосфатаза
  • туморни маркери, напр. CA-125
  • наличие на лекарства в серума

Този метод се използва и в хранително-вкусовата промишленост, където могат да бъдат открити следи от алергени (например мляко, фъстъци), ГМО или токсини в храната.

ELISA тест - какъв е този тест?

Диагнозата на например лаймска борелиоза с помощта на метода ELISA се състои в откриване на имунни протеини в биологичния материал - антитела, които възникват по време на отговора срещу антигените на Borrelia.

Антителата се тестват в два класа, IgM и IgG. IgM са първите антитела, които се появяват в тялото при контакт с бактерии и намаляват с времето.

Тяхното място е заето от по-устойчиви IgG антитела, които могат да останат в тялото в продължение на няколко десетки години.

По този начин наличието на бактерии в тялото се тества индиректно чрез откриване на антитела, специално насочени срещу Borrelia spirochetes.

Антителата на различни етапи на инфекцията могат да бъдат насочени срещу различни протеини на Borrelia. Например, на ранен етап това е протеинът p41.

В по-късните етапи започват да се появяват все повече и повече протеини, като p21, p30, p39, p43. Ето защо диагнозата на лаймската болест е изключително трудна.

Изборът на бактериални протеини е изключително важен, за да може тестът да има висока диагностична стойност. Следователно рутинно при диагностицирането на лаймска болест трябва да се използват ELISA тестове от II или III поколение, при които наборите от протеини се подбират така, че да се получи най-надеждният резултат.

ELISA тест и лаймска болест. Кога да се изпълнява?

Лаймската борелиоза е бактериално заболяване, причинено от бактерията Borrelia burgdorferi и нейните многобройни разновидности.

Диагнозата на заболяването не е лесна поради сложността на имунния отговор срещу Borrelia и несъвършенствата на лабораторните методи.

Най-широко използваният лабораторен метод е високочувствителният ELISA метод, който открива специфични антитела, образувани срещу бактериални протеини.

При диагностицирането на лаймска борелиоза се използва индиректен ELISA метод, при който се разграничават следните етапи:

  • инкубиране на ямките върху плочата с материал, събран от пациента, например серум. Ако в тествания материал има антитела срещу Borrelia, те се свързват с протеини на дъното на реакционната ямка
  • след това излишният серум се изплаква със специална измиваща течност (буфер) и т.нар. конюгат, т.е. антитяло, свързано с ензим, който се свързва с предишно свързани антитела в реакционните ямки
  • Субстратът за конюгата се добавя по-късно и няма (положителна) или няма цветна реакция (отрицателна)
  • последната стъпка е отчитането от четеца (спектрофотометър) на концентрацията на антитела срещу Borrelia в серума на пациента

Методът ELISA за лаймска болест се извършва с кръв, а при неврологични симптоми (невроборелиоза) и с гръбначно-мозъчна течност.

Синовиалната течност не трябва да се изследва, тъй като има голяма вероятност за фалшиво положителни резултати.

Основата за диагнозата на заболяването са клиничните симптоми, които го показват, потвърдени от резултатите от лабораторни изследвания.

Добавянето на резултат от лабораторен тест без наличие на симптоми не разрешава диагностицирането на лаймска болест, тъй като е доказано, че антитела срещу Borrelia spirochetes също се откриват при здрави хора.

Серологичната диагноза на лаймската борелиоза започва с полуколичествен скрининг тест ELISA. Ако резултатът е отрицателен, това означава, че не са открити Borrelia spirochetes или резултатът е фалшиво-отрицателен.

Ако резултатът е положителен или слабо положителен (двусмислен), потвърдителен Western blot тест, който е силно специфичен.

Това е за потвърждение на "истинността" на резултатите, получени с метода ELISA. По време на диагностиката не можете да пропуснете нито една от горните стъпки и например да извършите диагностика по метода Western blot или да направите диагноза въз основа на положителен резултат само с помощта на ELISA метода.

В Полша диагнозата на лаймската болест много често завършва на първия етап на скрининг, което причинява погрешно тълкуване на положителни или слабо положителни резултати.

Струва си да се знае

ELISA тест - цена. Колко струва ELISA тест?

Тестът струва около 60злоти и се прави веднага. Въпреки това, можете да изчакате около три месеца за резултатите от препоръката.

ELISA тест - резултати. Могат ли да са фалшиво положителни?

Фалшиво положителни резултати са резултат от кръстосаната реактивност на IgM антитела с други протеини. Антителата, произведени от тялото, могат „неправилно“ да разпознаят антиген на други микроорганизми като антиген на Borrelia.

Най-честите "грешки" се случват при хора, заразени с treponema pallidum, херпес вируси и при хора със системен лупус еритематозус и други ревматични заболявания.

ELISA тест - резултати. Могат ли да бъдат фалшиво отрицателни?

В ранния стадий на инфекцията могат да се появят фалшиво отрицателни резултати, след което тестът трябва да се повтори след около 3-4 седмици. Това се казва серологичен прозорец, т.е. началният период на инфекция, в който тялото все още не е "успяло" да произведе специфични антитела.

По същия начин, при имунокомпрометирани хора, които не произвеждат достатъчно антитела.

Голям проблем, особено при много интензивни инфекции, е появата на т.нар. имунни комплекси, които се състоят от антигени на Borrelia spirochetes и специфични антитела за тях.

Това прави антителата "невидими" за често използвани методи като ELISA и въпреки че присъстват в тествания материал, те не могат да бъдат открити.

В такива случаи лабораторията може да използва разграждане на имунни комплекси. Това лечение е предназначено за освобождаване на антителата. Този метод обаче не се използва широко поради липсата на стандартизация в лабораториите.

Струва си да се знае

Защо диагнозата на лаймската болест не е лесна?

Това се дължи на сложността на имунния отговор срещу Borrelia и ограниченията на лабораторните методи. Разнообразието от сортове и появата на нови инфекции, причиняващи инфекции, особено на европейския континент, не улеснява разработването на ефективни диагностични методи.

Наскоро в Европа се появиха още разновидности, като Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana и Borrelia spielmanii. Освен това в тялото спирохетите на Borrelia могат да се превърнат в кисти или да останат на места в тялото, недостъпни за клетките на имунната система.

По този начин е "невидим" за имунната система. Освен това е доказано, че тъканите могат да съдържат фрагменти от бактерии, които имат силно провъзпалителни свойства. Смята се, че те са отговорни за хроничните симптоми на лаймската болест, въпреки отрицателните резултати от проучванетолаборатория.

Референции

1. Witecka-Knysz E. и др. Лаймска болест: защо диагнозата е толкова трудна? Лабораторен диагностик април 2007 г.2. Мур А. и др. Текущи насоки, общи клинични клопки и бъдещи насоки за лабораторна диагностика на лаймска болест, Съединени щати. Emerg Infect Dis. юли 2016 г.; 22 (7) .3. Лабораторна диагностика на болести, пренасяни от кърлежи Препоръки на работната група: Национална камара на лабораторните диагностици, Национален институт по обществено здраве-Национален институт по хигиена, Национален консултант в областта на инфекциозните болести, Катедра по инфекциозни болести и невроинфекции, Медицински университет гр. Бялисток, Полско дружество по вирусология, Варшава 2014. Hosseini S. i co: Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) От А до Я. Springer 2022.

За автораКаролина Карабин, д-р, молекулярна биолог, лабораторен диагностик, Cambridge Diagnostics PolskaБиолог по професия, специалист по микробиология, и лабораторен диагностик с над 10 години опит в лабораторната работа. Завършил Колежа по молекулярна медицина и член на Полското дружество по човешка генетика. Ръководител на изследователски стипендии в Лабораторията по молекулярна диагностика към катедрата по хематология, онкология и вътрешни болести на Медицинския университет във Варшава. Защитила е титлата доктор на медицинските науки в областта на медицинската биология в 1-ви медицински факултет на Медицинския университет във Варшава. Автор на множество научни и научнопопулярни трудове в областта на лабораторната диагностика, молекулярната биология и храненето. Ежедневно, като специалист в областта на лабораторната диагностика, той ръководи отдела за съдържание в Cambridge Diagnostics Polska и си сътрудничи с екип от диетолози в CD Dietary Clinic. Той споделя практическите си знания по диагностика и диетотерапия на заболявания със специалисти на конференции, обучения, в списания и сайтове. Особено се интересува от влиянието на съвременния начин на живот върху молекулярните процеси в организма.

Категория:

Проучване