Помогнете на развитието на сайта, споделяйки статията с приятели!

PCR е тест, който се използва при диагностицирането на много заболявания. PCR методът позволява да се покаже директното присъствие на бактерии в организма, и по-специално нейната ДНК. PCR се използва, inter alia, в при диагностициране на лаймска болест. Каква е PCR техниката? Какво е PCR в реално време?

Съдържание:

  1. PCR (тест) - каква е PCR техниката?
  2. PCR (тест) - прилагане на PCR метода
  3. PCR (тест) - Лаймска болест
  4. PCR (тест) - резултати. Могат ли да са фалшиво положителни?
  5. PCR (тест) - резултати. Могат ли да бъдат фалшиво-отрицателни

PCR(полимеразна верижна реакция) е основният метод, използван в генетичните и молекулярните лаборатории. Той е разработен през 1983 г. от Кара Мълис, която е удостоена с Нобелова награда през 1993 г. за него.

PCR (тест) - каква е PCR техниката?

PCR тестсе състои в многократна амплификация (обикновено в 30-40 цикъла) на специфичен фрагмент от ДНК, например гени, кодиращи протеини на Borrelia, с използването на ензима полимераза.

След това, за да се визуализира амплифицираният ДНК фрагмент, се използват специални молекулярни багрила. PCR, благодарение на амплификацията на специфични ДНК фрагменти, е свръхчувствителен метод.

При PCR метода, ДНК фрагментите се амплифицират с помощта на специфични праймерни двойки за даден регион на бактериалната ДНК. Например, PCR целевите региони, използвани при диагностицирането на лаймска болест, са гени, кодиращи протеини, напр. 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA.

Биологичният материал, от който може да се извърши тестът е:

  • кръв
  • участък от кожата от мигрираща еритема
  • цереброспинална течност
  • синовиална или хрущялна течност
  • урина

PCR (тест) - прилагане на PCR метода

В допълнение към диагностицирането на лаймска борелиоза, PCR методът може да открие специфични ДНК фрагменти на други микроорганизми или хора. Следователно PCR методът се използва и при:

  • диагностика и наблюдение на вирусни инфекции: херпес вируси (херпес вирус, херпес зостер, Epstein-Barr, цитомегаловирус), HIV, вируси на хепатит (HBV и HCV)
  • диагностика и наблюдение на бактериални инфекции, особено тези бактерии,които не могат да бъдат идентифицирани чрез култури, например туберкулоза
  • диагностика и наблюдение на неопластични заболявания: левкемия, рак на гърдата, колоректален рак, рак на белия дроб
  • диагностика на предразположеност към рак: рак на гърдата и яйчниците (гени BRCA1 и BRCA2), колоректален рак (APC и CHEK2 гени)
  • диагностика на генетични заболявания: хемохроматоза (HFE ген), таласемия (HBA1 и HBA2 гени), цьолиакия (HLA гени)
  • тестове за бащинство, които установяват ДНК съвместимостта на детето и бащата
Струва си да се знае

В момента има много модификации на PCR метода. Например, при диагностицирането на лаймска болест се използват основно методите на вложена PCR (вложена PCR) и PCR в реално време ( ). Последният е количествен метод и позволява да се определи точния брой копия на ДНК на Borrelia в тествания биологичен материал.

PCR (тест) и лаймска болест

Основата за диагностициране на лаймска болест е серологичното изследване. Въпреки това, има клинични ситуации, които могат да доведат до фалшиво-отрицателни тези тестове:

  • серологичен прозорец, т.е. началният период на инфекция, в който тялото все още не произвежда специфични IgM и IgG антитела срещу Borrelia
  • при имунокомпрометирани хора, които не произвеждат достатъчно антитела
  • наличие на имунни комплекси, които се състоят от антигени на Borrelia и специфични за тях антитела и предотвратяват откриването на антитела чрез серологични методи

Ако се подозира, че пациентът има симптоми на лаймска болест и резултатите от серологичния тест са отрицателни, може да се извърши молекулен тест, базиран на PCR метода.

ДНК на спирохети Borrelia може да бъде открита в ранните етапи на инфекция, тъй като тогава броят на спирохетите в телесните течности е най-висок.

При диагностицирането на лаймска борелиоза се използват предимно серологични методи като ELISA, но в някои клинични ситуации генетичното изследване с помощта на PCR метода е полезно.

Колкото по-дълго е времето от инфекцията, толкова по-малка е вероятността за откриване на бактериална ДНК. Ето защо, в някои случаи, преди да се извърши PCR тест, бактериите се отглеждат на специална среда в продължение на 1-2 седмици и след това тестът се извършва.

Този подход се използва в случай на подозрение за лаймска болест и събрана цереброспинална течност. В късната фаза на инфекцията е по-подходящо да се извърши ELISA тест.

Методът PCR не трябва да се използва при рутинната диагностика на лаймска болест поради липсата на стандартизацияотносно появата на сортове Borrelia burgdorferi в Полша.

Въпреки това, в случай на трудности при диагностицирането (особено в ранен стадий на заболяването), резултатът от PCR теста е полезен в диагностичния процес.

Положителен резултат от теста означава, че в тествания материал е открито присъствието на Borrelia burgdorferi ДНК и нейните варианти, но не обяснява дали организмът е активно заразен. От друга страна, отрицателният резултат не изключва наличието на бактерии в тялото.

Някои лаборатории предлагат тестове за наличие на ДНК на Borrelia в кърлежите. Резултатът от такъв тест обаче не е в основата на диагностицирането на лаймска болест при ухапан човек.

PCR - резултати. Могат ли да са фалшиво положителни?

PCR е свръхчувствителен метод и в същото време много чувствителен към замърсяване. Ето защо е много важно при PCR-базирани тестове да се избере подходящ вътрешен контрол, за да се изключат фалшиво положителни резултати.

Правилното събиране на материал за тестове, както и опитът и надеждността на диагностика, извършващ теста, също са от ключово значение.

PCR - резултати. Могат ли да бъдат фалшиво-отрицателни

Както при всеки лабораторен тест, също и при PCR метода, могат да се появят фалшиво отрицателни резултати. Тук е от решаващо значение да се вземе кръв за подходящ антикоагулант, тъй като някои от тях, като хепарин, могат да инхибират PCR реакцията.

Събирането на материал след започване на антибиотична терапия може да намали ефективността на PCR реакцията и да увеличи вероятността от фалшиво-отрицателни резултати.

Трябва също да се помни, че бактериите Borrelia живеят за много кратко време в кръвта и телесните течности, тъй като благодарение на специални рецептори те проникват много бързо в "труднодостъпни" места в тялото.

Следователно, за разлика от диагностиката на други микроорганизми, броят на спирохетите на Borrelia в биологичния материал е малък, понякога дори на границата на откриване на PCR метода. Това също може да доведе до фалшиво отрицание.

Референции

  1. Dunaj J. и др. Значението на PCR метода в диагностиката на лаймската борелиоза. Прегледайте Епидемиол. 2013, 67, 119 - 123.
  2. Лабораторна диагностика на болести, пренасяни от кърлежи Препоръки на работната група: Национална камара на лабораторните диагностици, Национален институт по обществено здраве-Национален институт по хигиена, Национален консултант в областта на инфекциозните болести, Отделение по инфекциозни болести и невроинфекции , Медицински университет в Бялисток, Полско дружество по вирусология, Варшава 2014.
  3. Ružić-Sabljić E. и Cerar T. Напредък в молекулярната диагностика на лаймската болест. Експерт Rev Mol Diag. 2022 гянуари; 17 (1): 19-30.
  4. Valones M.A.A. и др. Принципи и приложения на полимеразната верижна реакция в медицинските диагностични области: преглед. Braz J Microbiol. 2009 януари-март; 40 (1): 1-11.
За автораКаролина Карабин, д-р, молекулярна биолог, лабораторен диагностик, Cambridge Diagnostics PolskaБиолог по професия, специалист по микробиология, и лабораторен диагностик с над 10 години опит в лабораторната работа. Завършил Колежа по молекулярна медицина и член на Полското дружество по човешка генетика. Ръководител на изследователски стипендии в Лабораторията по молекулярна диагностика към катедрата по хематология, онкология и вътрешни болести на Медицинския университет във Варшава. Защитила е титлата доктор на медицинските науки в областта на медицинската биология в 1-ви медицински факултет на Медицинския университет във Варшава. Автор на множество научни и научнопопулярни трудове в областта на лабораторната диагностика, молекулярната биология и храненето. Ежедневно, като специалист в областта на лабораторната диагностика, той ръководи отдела за съдържание в Cambridge Diagnostics Polska и си сътрудничи с екип от диетолози в CD Dietary Clinic. Той споделя практическите си знания по диагностика и диетотерапия на заболявания със специалисти на конференции, обучения, в списания и сайтове. Особено се интересува от влиянието на съвременния начин на живот върху молекулярните процеси в организма.

Помогнете на развитието на сайта, споделяйки статията с приятели!

Категория:

Проучване